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  • 線粒體復合體 Ⅳ 試劑盒
產品名稱:

線粒體復合體 Ⅳ 試劑盒

產品品牌: 索萊寶 價格: 3200
廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2018-11-06
線粒體復合體 Ⅳ 試劑盒

產品概述

線粒體復合體 Ⅳ 試劑盒說明書
產品簡介 :
線粒體復合體Ⅳ又稱細胞色素 C 氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責催
化還原型細胞色素 C 的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。
還原型細胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收,線粒體復合體Ⅳ催化還原型細胞色素 C 生成氧化型細胞色
素 C,因此 550nm 光吸收下降速率能夠反映線粒體復合體Ⅳ酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產品內容 :
試劑一:25 mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:5 mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:0.5 mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑四:液體 10 mL×2 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×2 支,-20℃保存;
試劑六:粉劑×2 支,-20℃保存;
工作液的配制:臨用前取試劑四、試劑五、試劑六各一支,將試劑五和試劑六依次轉移到試劑四中混合
溶解。分批配制工作液是為了防止當天不能測完,導致工作液失敗。
操作步驟 :
一 、 線粒體 復合體 Ⅳ 的提取 :
(1) 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
(2) 將勻漿 4℃ 600g 離心 5min。
(3) 將上清液轉移另一離心管中,4℃ 11000g 離心 10min。
(4) 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄露的復合體Ⅳ(此步可選做)。
(5) 在沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超生波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間歇 10 秒,重復 30
次),用于復合體Ⅳ酶活性測定,并且用于蛋白含量的測定。
二 、 測定 步驟 :
1. 調零
用蒸餾水于 550nm 處調零
2. 樣本測定
(1) 取 800uL 工作液加入 1mL 玻璃比色皿中,在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)孵育 5min。
(2) 取出比色皿,加入 40uL 樣本,混勻,立即記錄 550nm 處初始吸光值 A1,37℃(哺乳動物)或 25℃(其
他物種)中準確反應 1min,記錄 550nm 處 1min 后的吸光值 A2,計算 ?A=A1-A2。
注意:
若 A1-A2 大于 0.2,需將樣本用試劑二稀釋適當倍數,使 A1-A2 小于 0.2,可提高檢測靈敏度。
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 010- - 56371207
Fax: 010- - 56371281/82
Http://www.solarbio。。cn
復合體 Ⅳ 活?單位的計算 :
1 、 組織中 復合體 Ⅳ 活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅳ活力(U/mg prot)=反應總體積(840µL)÷樣本體積(40µL)÷反應時間(1min)÷細胞色素 C 消光
系數(19.1×10 -3 )×?A÷蛋白濃度(mg/mL)=1099×?A ÷蛋白濃度(mg/mL)
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅳ活力(U/g 鮮重)=反應總體積(840µL)÷樣本體積(40µL)÷反應時間(1min)÷細胞色素 C 消光系
數(19.1×10 -3 )×?A÷樣本鮮重(g/mL)=1099×?A ÷樣本鮮重(g/mL)
2 、 細菌或細胞中 復合體 Ⅳ 活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅳ活力(U/mg prot)=反應總體積(840µL)÷樣本體積(40µL)÷反應時間(1min)÷細胞色素 C 消光
系數(19.1×10 -3 )×?A÷蛋白濃度(mg/mL)=1099×?A÷蛋白濃度(mg/mL)
(2)按細菌或細胞密度計算
單位定義:每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力
單位。
復合體Ⅳ活力(U/10 4 cell)=反應總體積(840µL)÷樣本體積(40µL)÷反應時間(1min)÷細胞色素 C 消光系
數(19.1×10 -3 )×?A÷細菌或細胞密度(10 4 /mL)=1099×?A÷細菌或細胞密度(10 4 /mL)

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