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總結實驗室常用染色液的制備方法

發布日期: 2016-04-25
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染色液是實驗室中常用的試劑之一,分為天然染液和人工染料,也分堿性染料和酸性染料,以下來詳細介紹一下實驗室常見染色液的配制。
⒈ 碘-碘化鉀(I2-KI)溶液 能將淀粉染成藍紫色,蛋白質染成黃色,也是植物組織化學測定的重要試劑。 
配方:碘化鉀2g ;蒸餾水300ml ; 碘1g 
先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中,待全溶解后再加碘,振蕩溶解后稀釋300mL,保存在棕色玻璃瓶內。用時可將其稀釋2-10倍,這樣染色不致過深,效果更佳。 
⒉ 蘇丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角質化的細胞壁及脂肪、揮發油、樹脂等染成紅色或淡紅色,是的脂肪染色液。 
配方:(1)蘇丹III或蘇丹Ⅳ干粉 ; 95%酒精10ml ; 過濾后再加入10ml甘油 
(2)先將蘇丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。 
(3)蘇丹III 70%乙醇的飽和溶液。 
⒊ 1%醋酸洋紅(aceto carmine) 酸性染料,適用于壓碎涂抹制片,能使染色體染成深紅色,細胞質成淺紅色。 
配方:洋紅1g ; 45%醋酸100ml 
煮沸2h左右,并隨時注意補充加入蒸餾水到原含量,然后冷卻過濾,加入4%鐵明礬溶液1~2滴(不能多加,否則會發生沉淀),放入棕色瓶中備用。 
⒋ 改良苯芬品紅染色液(Carbol fuchsine) 核染色劑。 
配制步驟: 先配成三種原液,再配成染色液。 
原液A:3g堿性品紅溶于100ml 70%酒精中。 
原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。 
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福爾馬林(38%的甲醛)。 
(原液A和原液C可長期保存,原液B限兩周內使用) 
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~,配成10%~20%濃度的石炭酸品紅液,放置兩周后使用,效果顯著(若立即用,則著色能力差)。 
適用范圍:適用于植物組織壓片法和涂片法,染色體著色深,保存性好,使用2~3年不變質。山梨醇為助滲劑,兼有穩定染色液的作用,假如沒有山梨醇也能染色,但效果較差。 
⒌ 中性紅(neutral red)溶液 用于染細胞中的液泡,可鑒定細胞死活。 
配方:中性紅 ;蒸餾水100ml 
使用時再稀釋10倍左右。 
⒍ 曙紅Y(伊紅,eosin Y)酒精溶液 常與蘇木精對染,能使細胞質染成淺紅色,起襯染作用。 
配方:曙紅 ; 95%酒清100ml 
也常用于95%酒精脫水時,加入少量曙紅溶液,其目的是在包埋、切片、展片、鏡檢時便于識別材料。 
⒎ 釕紅(ruthenium red)染液 釕紅是細胞胞間層專性染料,其配后不易保存,應現用現配。 
配方:釕紅5~10mg ; 蒸餾水25-50ml 
⒏ 龍膽紫(gentian violet) 為酸性染料,適用于細菌涂抹制片。 
配方:龍膽紫0.2~1 g ;蒸餾水100ml 
⒐ 苯胺蘭(aniline blue)溶液 為酸性染料,對纖維素細胞壁、非染色質的結構、鞭毛等,尤其是染絲狀藻類效果好。還多用于與真曙紅作雙重染色,對于高等植物多用于與番紅作雙重染色。 
配方:苯胺蘭1 g ; 35%或95%酒精100ml 
⒑ (phloroglucin)溶液用于測定木質素。 
配方:5g ; 95%酒精100ml 
注:此溶液呈黃褐色即失效。 
⒒ 橘紅G(orange G)酒精溶液 為酸性染料,染細胞質,常作二重或三重染色用。 
配方:橘紅G 1g ; 95%酒精100ml 
⒓ 番紅(safranin O)為堿性染料,適用于染木化、角化、栓化的細胞壁,對細胞核中染色質、染色體和花粉外壁等都可染成鮮艷的紅色。并能與固綠、苯胺蘭等作雙重染色,與橘紅G、結晶紫作三重染色。 
配方:(1)番紅水溶液番紅0.1或1 g ;蒸餾水100ml 
(2)番紅酒精溶液番紅0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml 
(3)苯胺番紅酒精染色液 
甲液 番紅5 g +95%酒精50ml 
乙液 苯胺油20ml +蒸餾水450ml 
將甲、乙二溶液混合后充分搖均勻,過濾后使用。 
⒔ 固綠(fast green)又稱快綠溶液。為酸性染料,能將細胞質,纖維素細胞壁染成鮮艷綠色,著色很快,故要很好的掌握著色時間。 
配方:(1)固綠酒精液固綠0.1 g ; 95%酒精100ml 
(2)苯胺固綠酒精液固綠 1 g ;無水酒精 100ml ;苯胺油 4ml 
配后充分搖勻,過濾后使用?,F配現用效果好。 
⒕ 蘇木精(hematoxylin)染液蘇木精是植物組織制片中應用廣的染料,是蘇木科植物蘇木的心材提取出來的。它是很強的細胞核染料,而且可以分化出不同顏色。配方很多,現舉海登漢氏(Heidenhain's)蘇木精染色液,又稱鐵礬蘇木精染色液。 
配方:甲液(媒染劑): 硫酸鐵銨(鐵明礬)2-4g ;蒸餾水100ml 
(必須保持新鮮,好臨用之前配制) 
乙液(染色劑):蘇木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸餾水 90ml 
配制步驟:(1)將蘇木精溶于酒精中,瓶口用雙層紗布包扎,使其充分氧化(通常在室內放置兩個月后方可使用)。(2)加入蒸餾水,塞緊瓶口,置冰箱中可長期保存。 
切片需先經甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后經水稍洗再用另一瓶甲液分色適度。 
鐵礬蘇木精染液為細胞學上染細胞核內染色質好的染色劑,但要注意甲液與乙液在任何情況下決不能混合。 
⒖亞甲基藍染液 常用于細菌、活體細胞等的染色。 
取亞甲基藍,溶于100ml蒸餾水中即成。 
⒗詹納斯綠B(Janus green B)染色液 
將 綠溶于100ml蒸餾水,配成飽和水溶液。用時需稀釋。稀釋的倍數應視材料不同而異。 
⒘硫堇染色液 
取克硫堇(也稱勞氏青蓮或勞氏紫)粉末,溶于100ml蒸餾水中,即可使用。使用此液時,需要用微堿性自來水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反應。 
18.黑色素液 
水溶性黑素10g,蒸餾水100mL,甲醛(福爾馬林)??捎米髑v膜的背景染色。 
19.墨汁染色液 國產繪圖墨汁40mL,甘油2mL,液體石炭酸2mL。先將墨汁用多層紗布過濾,加甘油混勻后,水浴加熱,再加石炭酸攪勻,冷卻后備用。用作莢膜的背景染色。 
20.呂氏(Loeffier)美藍染色液 
A液:美藍(methylene blue,又名甲烯藍),95%乙醇30mL; 
B液:。 
混合A液和B液即成,用于細菌單染色,可長期保存。根據需要可配制成稀釋美藍液,按1∶10或1∶100稀釋均可。 
21.革蘭氏染色液 
(1)結晶紫(cristal violet)液:結晶紫乙醇飽和液(結晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸銨水溶液80mL。將兩液混勻置24h后過濾即成。此液不易保存,如有沉淀出現,需重新配制。 
(2)蘆戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI 2g,蒸餾水300mL。先將KI溶于少量蒸餾水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸餾水300mL,即成。配成后貯于棕色瓶內備用,如變為淺黃色能使用。 
(3)95%乙醇:用于脫色,脫色后可選用以下(4)或(5)的其中一項復染即可。 
(4)稀釋石炭酸復紅溶液:堿性復紅乙醇飽液(堿性復紅1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸餾水90mL。 
(5)番紅溶液:番紅O(safranine O,又稱沙黃O),95%乙醇100mL,溶解后可貯存于密閉的棕色瓶中,用時取20mL與80mL蒸餾水混勻即可。 
以上染色液配合使用,可區分出革蘭氏染色陽性(G+ )或陰性(G- )細菌,前者藍紫色,后者淡紅色。 
22.齊氏(Ziehl)石炭酸復紅液:堿性復紅溶于95%乙醇10mL中為A液;溶液100mL為B液?;旌螦、B液即成。 
23.姬姆薩(Giemsa)染色液 
(1)貯存液:稱取姬姆薩粉,甘油33mL,甲醇33mL。先將姬姆薩粉研細,再逐滴加入甘油,繼續研磨,后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用。 
(2)應用液(臨用時配制):取1mL貯存液加19mLpH7.4磷酸緩沖液即成。也可以貯存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。 
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液 
稱取瑞氏染色粉6g,放研缽內磨細,不斷滴加甲醇(共600mL)并繼續研磨使溶解。經過濾后染液須貯存一年以上才可使用,保存時間愈久,則染色色澤愈佳。 
以上就是一些目前實驗室中常用染色液的配置方法。

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