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嘌呤霉素的作用有哪些

發布日期: 2016-04-21
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嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一種抗生素,廣泛用作蛋白質合成的抑制劑。其結構與氨酰tRNA 3′端上的AMP結構相似,肽酰轉移酶能促使氨基酸與嘌呤霉素結合形成肽酰嘌呤霉素,從核糖體上脫落,從而使蛋白質合成反應中斷。嘌呤霉素的作用如下:

嘌呤霉素的作用:

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細胞。嘌呤霉素Puromycin某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。嘌呤霉素Puromycin作為氨酰-tRNA分子3’末端的類似物,能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。但是嘌呤霉素同A位點結合后,不會參與隨后的任何反應,從而導致蛋白質合成的提前止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素Puromycin抗性基因:

對嘌呤霉素的抗性取決于編碼嘌呤霉素N-乙酰轉移酶(PAC)的?Pac基因,遺傳工程研究使用的Pac基因分離自嘌呤霉素產生菌Streptomycesalboniger。

嘌呤霉素Puromycin普遍應用:

1)嘌呤霉素作用于篩選和維持培養含Pac基因的哺乳動物穩定轉染細胞。嘌呤霉素在細胞穩轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關,現在商業化的慢病毒載體多數都攜帶pac基因。

2)在某些特定情況下,嘌呤霉素亦可以用來篩選轉化攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株。

化學特性:化學名稱:

3(a-Amino-p-methoxyhydro?cinnamamido)-3–deoxy-N,N–dimethyladenosine·2HClCAS

No.:58-58.2,

分子式:C22H29N7O5.2HCl,

分子量:544.43g/mo

純度:>98%(HPLC),易溶于水5-50mg/mL,-20度保存。

嘌呤霉素Puromycin應用濃度:哺乳動物細胞的推薦使用濃度為1-10?μg/mL,佳濃度需要殺滅曲線來確定。LB瓊脂培養基篩選穩定轉化pac基因的大腸桿菌,使用濃度為125μg/mL。使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩轉株需要的pH值調節,而且受宿主細胞本身的影響。

嘌呤霉素可由白色鏈球菌(Streptomyces.alboniger)發酵制得的抗生素。熔點175.5~177.0℃。旋光度-11 (乙醇)。在酸性溶液中分解成為6-二甲胺嘌呤,O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。結構與氨基酰tRNA分子中腺苷相連結的氨基酸末端基因相似,因而它可作氨基酰tRNA的類似物,從而取代一些氨基酰tRNA進入核糖體的A位與正在延伸的多肽鏈結合,當延長中的肽轉入此異常A位時,容易脫落,以肽基嘌呤霉素的形式從核糖核蛋白體上早期解離,終止肽鏈合成,從而抑制了蛋白質的合成。由于嘌呤霉素對原核和真核生物的翻譯過程均有干擾作用,故難于用做抗菌藥物,嘌呤霉素作用于研究蛋白質合成的生物化學工具。有人試用于腫瘤治療。

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